miRNA-214对胃癌细胞周期和凋亡影响的研究
miRNA-214对胃癌细胞周期和凋亡影响的研究
熊欣,  郑长黎
中南大学湘雅病理学系

  目的:研究miRNA-214在胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中的表达及其对细胞周期和凋亡的影响,初步探讨其机制。方法:(1)荧光定量PCR法检测人正常胃粘膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中miRNA-214的表达;(2)瞬时转染反义核苷酸(miRNA-214 inhibitor)下调miRNA-214的表达;(3)流式细胞术分析下调miRNA-214后的细胞生长周期和凋亡率的变化;(4)免疫细胞化学检测miRNA-214的靶基因PTEN蛋白在胃癌细胞中的表达。结果:(1)miRNA-214 在人胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中的表达相对于人正常胃粘膜细胞系GES-1上调,△Ct值分别为5.28±0.12,6.08±0.14,5.89±0.14,7.56±0.18,前三者分别与后者相比差异有统计学意义(P<0.05);(2)转染miRNA-214 inhibitor能使BGC823中miRNA-214下调,转染前后的△Ct值分别为5.32±0.59,7.11±0.33,差异有统计学意义(P<0.05);(3)转染后BGC823、MKN45         细胞周期改变,G1期细胞增多,转染前后分别为49.33 % ± 7.99 %和 60.20 % ± 3.38 %,54.85 % ± 0.64 %和69.90 % ± 0.28 %,差异有统计学意义( P<0.05);S期细胞减少,转染前后分别为32.67 % ± 1.91 %和21.87 % ± 3.20 %,31.20 % ± 0.42 %和18.25 % ± 1.34 %,差异有统计学意义(P<0.05),但对细胞凋亡率无影响,转染前后分别为2.71 % ± 1.74 %和2.88 % ± 2.39 %,2.32 % ± 0.57 %和1.89 % ± 0.98 %,差异无统计学意义(P>0.1);对SGC7901细胞周期和凋亡率均无影响,转染前后,G1期细胞分别为49.35 % ± 3.18 %和47.95 % ± 2.76 %,S期细胞分别为34.4 % ± 3.68 %和34.65 % ± 3.61 %,凋亡率分别为2.46 % ± 0.25 %和5.22 % ± 2.79 %,差异无统计学意义(P>0.1);(4)免疫细胞化学显示,转染miRNA-214 inhibitor后BGC823、MKN45中PTEN蛋白表达增强,SGC7901中PTEN蛋白表达无变化。结论:(1)人胃癌细胞系BGC823、MKN45和SGC7901中的miRNA-214呈高表达;(2)miRNA-214能使BGC823、MKN45细胞的G1期细胞减少,S期细胞增多,下调PTEN可能是其作用机制之一;(3)miRNA-214对BGC823、MKN45和SGC7901细胞的凋亡无影响。

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